Ранняя диагностика болезни Гоше имеет важнейшее значение для скорейшей реализации соответствующих планов оценки и ведения пациентов.
Для чего исследовать активность фермента глюкоцереброзидазы?
Болезнь Гоше — аутосомно-рецессивное заболевание, вызванное мутациями гена, кодирующего фермент глюкоцереброзидазу (GBA1)1,2. В связи с этим диагностика болезни Гоше часто основывается на анамнезе, физикальном обследовании, лабораторных исследованиях, а также подтверждается выявлением дефицита ферментативной активности глюкоцереброзидазы1. Также рекомендованы исследования для выявления генетических мутаций, а семейный анамнез заболевания может подтвердить диагноз подозреваемой или доказанной болезни Гоше1.
Раньше диагноз болезни Гоше часто устанавливали на основании обнаружения клеток Гоше в аспирате костного мозга либо при развитии у пациента необъяснимой значительной спленомегалии с последующей спленэктомией. Однако эти диагностические методы были неточными, потому что при исследовании костного мозга с клетками Гоше можно спутать многие другие клетки, так называемые псевдоклетки Гоше. Тем не менее исследование костного мозга может потребоваться, если на фоне лечения размеры селезенки не уменьшаются либо у пациента увеличиваются лимфатические узлы или появляются B-симптомы, указывающие на развитие лимфомы1.
Что представляет собой исследование активности фермента глюкоцереброзидазы?
Определение активности глюкоцереброзидазы в лейкоцитах или фибробластах кожи после биопсии кожи считается «золотым стандартом» диагностики болезни Гоше1,3. Сухие пятна крови используют для скринингового анализа активности глюкоцереброзидазы4. Исследование, для которого необходимо около 5 мл крови с добавлением ЭДТА или гепарина, — это все, что требуется для подтверждения диагноза болезни Гоше, поскольку это исследование позволяет напрямую измерить активность глюкоцереброзидазы в лейкоцитах5,6. В случае лейкопении можно исследовать культивированные фибробласты кожи, полученные при биопсии кожи5. Диагностику болезни Гоше должны проводить специализированные лаборатории, обладающие определенным опытом измерения активности глюкоцереброзидазы и интерпретации результатов этого исследования5–9. У пациентов с болезнью Гоше активность глюкоцереброзидазы составляет примерно 10–30% от нормы8,9.
Было показано, что у пациентов с болезнью Гоше остаточная активность глюкоцереброзидазы значимо коррелирует с возрастом и активностью хитотриозидазы10. Тем не менее измерение активности глюкоцереброзидазы не позволяет отличить пациентов с болезнью Гоше, которые являются гетерозиготными носителями мутаций гена GBA1, и лиц, не страдающих болезнью Гоше. Более того, это диагностическое исследование крови не позволяет получить гистологические данные о состоянии костей, печени или селезенки, необходимые для установления диагноза1. Однако ранее была выявлена статистически значимая связь между остаточной ферментативной активностью глюкоцереброзидазы и степенью поражения костей10.
Клинический опыт диагностики болезни Гоше
Описаны результаты биохимической диагностики с использованием образцов крови, взятых в лаборатории биохимической генетики в Египте у 5128 пациентов с подозрением на болезнь Гоше. У каждого пациента методом венепункции собирали по 5 мл цельной крови в пробирки с ЭДТА. Получали плазму крови для исследования содержания хитотриозидазы, а лейкоциты отделяли для определения активности глюкоцереброзидазы с использованием синтетического субстрата. Во всех случаях измерение активности глюкоцереброзидазы проводили параллельно с исследованием содержания хитотриозидазы в периферических лейкоцитах. У здоровых людей, не страдающих болезнью Гоше, нормальная активность глюкоцереброзидазы составляла 1–5 мкмоль/г белка в час, хитотриозидазы — 4–80 мкмоль/л/час11.
Из 5128 подозреваемых случаев болезни Гоше диагноз был установлен у 882 пациентов (17%). У большинства этих пациентов (81,5% [719/882]) родители были кровными родственниками, соотношение мужчин и женщин составило 1,6:1. Возраст на момент установления диагноза составлял от 3 месяцев до 45 лет, при этом у 97,5% пациентов диагноз установили в возрасте от 1,7 года до 8 лет. Снижение активности глюкоцереброзидазы наблюдалось у 99% пациентов с болезнью Гоше. Среднее значение активности глюкоцереброзидазы у этих пациентов составляло 0,3 мкмоль/г белка в час, что соответствует 30% от нижней границы референсного диапазона. У этих пациентов активность хитотриозидазы была повышена (среднее значение [стандартное отклонение, СО] 6 243 [20 211] мкмоль/л/ч). Однако у девяти пациентов активность хитотриозидазы была равна нулю, а активность глюкоцереброзидазы составляла 45% от нижней границы референсного диапазона11.
В 103 случаях подозреваемой болезни Гоше отмечалось повышение средней (СО) активности хитотриозидазы (131,8 [24,0] мкмоль/л/ч), при этом средняя активность глюкоцереброзидазы (3,2 мкмоль/г белка в час) была нормальной11.
Почему глюкозилсфингозин (лизо-Gb1) можно использовать в качестве биомаркера болезни Гоше?
У детей и взрослых пациентов с болезнью Гоше значительно повышено содержание глюкозилсфингозина (лизо-Gb1), что делает возможным его использование в качестве биомаркера заболевания.
Можно ли использовать хитотриозидазу в качестве биомаркера болезни Гоше?
У пациентов с болезнью Гоше 1 типа активность хитотриозидазы значительно повышена, поэтому этот фермент может быть ценным биомаркером при диагностике заболевания и при последующем наблюдении за пациентами.
Можно ли использовать лиганд хемокина CC18 (CCL18) в качестве биомаркера болезни Гоше?
У пациентов с болезнью Гоше 1 типа содержание CCL18 значительно повышено, поэтому он может быть полезным биомаркером при оценке тяжести заболевания и ответа на лечение.